洗脱色谱法
这种方法,采用与列,通过整个系统涉及溶质迁移和溶质检测出现的列。探测器连续监视溶质的量新兴流动相的流eluate-and能传感信号,通常一个电压,这是注册为峰在一个纸带记录器。记录仪跟踪溶质缺席的基线。阴谋的溶质浓度沿色谱收益率相同的溶质迁移协调发展高峰。集体土地是浓度资料;理想高斯(正常的钟,或误差曲线)。信号强度也可能是数字化和存储在一个计算机内存以后的回忆。溶质的报告行为保留时间,溶质迁移所需的时间,或者洗提,从列,从即时测量样本注入移动阶段流最大峰值的出现。的调整保留时间是衡量从出口的unretained溶质的外观。这些时间的依赖流量被报道保留量,计算的保留时间乘以体积流动相的流速。
开发了平面上的点床上,产生的一系列的山峰在纸上记录,或计算机数据的打印输出各种形式的色谱。
保留机制
分类的保留机制是近似的,因为实际上保留的混合机制。如果分区系数是常数作为溶质的量是不同的,被称为线性色谱分离。这种情况是非常可取的,因为溶质区域方法对称的高斯分布。如果系统是非线性的,溶质区不对称。在最常见的不对称情况下,区“尾巴”成一个溶质区污染它。
在吸附色谱溶质分子债券直接表面的固定相。可能包含各种各样的平稳阶段吸附网站不同的韧性与它们结合的分子和它们的相对丰度。净效应决定了吸附剂活性。分配色谱法利用一个支持材料涂有固定相的液体。的例子是(1)水了纤维素,纸、硅或(2)薄膜涂布或连着一个固体。固体支持理想是不活跃的溶质的保留,但它实际上不是;保留主要是由于溶质解决方案在静止的液相。
正如上面提到的,凝胶排阻层析法包括的固定相分子的流动相被困在固体的多孔结构。溶质分子扩散时保留这些毛孔的。他们留在毛孔是一个函数的大小,决定了渗透的深度。有一定的分子大小,代表了“排除在外”。分子的大小和更大的被排除在毛孔,不分离。他们第一次出现在洗脱色谱法。在另一端的频谱大小,有一定规模的所有小分子的大小和渗透毛孔。这些分子也不分离;他们洗提。凝胶过滤色谱法指的是凝胶排阻方法采用水作为流动相;凝胶渗透色谱法利用有机流动相。
非常特定的分子间的相互作用,”锁和钥匙”,是已知的生物化学。例子包括酶-蛋白质,抗原- - - - - -抗体,激素- - - - - -受体绑定。酶的结构特征将连接到一个特定的蛋白质的结构特征。亲和色谱法利用这个功能通过绑定配位体与期望的交互能力支持如凝胶用于凝胶过滤色谱法。配体阻碍溶质与兼容的结构特征,并将所有其他溶质的混合物。溶质由流动相的改变,如合并筛选了竞争溶质,改变酸度,或改变洗脱液的离子强度。
没有固定相field-flow分离;流动相的不同速度流或层与它们之间的溶质分布产生分离。
阶段
气相色谱法
分类阶段给出了物理状态的流动相固定相的状态。气相色谱使用气体液体为流动相,称为载气,被细分为气-固色谱法和气液色谱法。承运人气体使用,如氦,氢,氮已经很虚弱与溶质分子间的相互作用。分子筛用于气凝胶排阻层析法应用于气体的低分子量。吸附在固体往往给非线性系统。气液色谱法采用液体固定相,解决部队提供保留。在普通压力的溶质气体阶段表现为理想气体的混合物。负责选择性保留所有交互发生在固定相。因此,各种液体静止阶段被使用;有数百人被报道。
有机的基本规则化学是,“像溶解喜欢的。“因此,极地溶剂水极地溶质溶解乙醇而不是碳氢化合物辛烷。非极性溶剂苯将溶解辛烷但不是乙醇。极性固定相将保留极性溶质,通过那些非极性。出现的顺序与非极性固定相逆转。Lutz Rohrschneider德国发起的研究,导致一组标准的溶质种类、溶剂探针,这有助于平稳阶段的顺序极性和分子间的相互作用。
在气相色谱溶质的保留最常被称为直链烃类的行为;即。,relative retention volumes are used. On a logarithmic scale this becomes the保留指数(RI)引入的瑞士化学家欧文深圳。Kovats。国际扶轮值溶剂的探针作为Rohrschneider分类方法的基础。类似的计划提出了液体系统。
发生了气相分子间的相互作用,利用超临界流体色谱法。交互式使用高压气体的例子二氧化碳,一氧化二氮,氨、碳氢化合物、硫六氟化,卤代甲烷。
混合物的溶质有宽沸点极性范围或有多种官能团构成特定的问题。在低column-operating温度高波动性的溶质(或者更精确地说,溶质与大型液体溶液活度系数的数值)出现在早期好看的色谱峰。通过列溶质与低波动进展缓慢,与峰展宽的充足的机会。这些溶质出现很低,可能被忽视的广泛的山峰。增加列温度增加气相中的溶质的浓度。高波动性的溶质,然而,现在花大部分的时间在mobile-gas阶段,迁移迅速通过列显示为未解决的峰值。接下来的溶质是充分解决。这被称为一般洗脱的问题。一个简单的解决方案是增加列温度过程中分离。好看,高挥发性溶质从波动性的之前的列在较低的温度下溶质离开原点列入口。这种技术称为程序升温气相色谱法。